基于外泌體相關基因的全基因組微擾分析篩選系統
發布時間：
2024-07-12
來源：
https://doi.org/10.1101/2023.09.07.556640
作者:陸路1#，尹建新1#，陳寧1#，郭曉飛1#，韓春樂1#，王淼1#，杜煥青1#，李慧芳1#，潘新剛1#，高夢雅1#，王娜1#，齊冬麗1#，王建紅1#，董鳳偉1#，李天石2 #，葛嘯虎1*
發布日期:2023-09-08
摘要:據報道，外泌體對體內生理和病理狀態有重要影響。外泌體作為一種藥物傳遞載體已被廣泛研究，一些外泌體藥物已進入臨床研究階段。外泌體的產生、運輸和分泌機制仍有待深入研究。因此，在這里，我們開發了一種新的基于CRISPR uni的基因篩選系統，通過該系統，我們可以在全基因組范圍內揭示外泌體的生物發生、運輸和攝取機制。該系統由兩部分組成:一部分是基因敲除組件;另一部分是一個獨特的分子標識(UMI)標記組件，它可以標記敲除細胞產生的外泌體，其中每個sgRNA對應一個特定的UMI。這樣，通過檢測外泌體中裝載的UMI，我們可以追蹤敲除基因。在本研究中，我們首先分別使用質粒和慢病毒驗證了每個組分的功能。接下來，我們使用單個慢病毒模擬慢病毒庫對細胞的感染，以驗證篩選系統的功能。最后，我們構建了一個基于crispr - uni的文庫，針對15個基因(對外泌體生物發生有明確影響的基因)，進一步驗證篩選系統的可靠性。該篩選系統的開發對于深入研究外泌體的產生和分泌機制，以及提高外泌體的產生和體外循環功能具有重要的意義。
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